产品概述
细胞内有各种各样的细胞器，承担着各种各样必须的生命活动。其中线粒体不仅是通过氧化磷酸化反应生成 ATP 的场所，它还与癌症、细胞衰老、阿尔兹海默症、帕金森综合症等神经退行性疾病紧密相关，因此它是细胞内最重要的细胞器之一。
在对线粒体的形态和动态进行观察以及定量检测时，通常使用小分子荧光探针标记和荧光蛋白的基因转染两种方法。荧光蛋白的基因转染存在转染效率不稳定等情况，因此操作简便的小分子荧光探针的使用更为广泛。
现在市面上销售的小分子荧光探针中，多为含有氯甲基的探针，该探针存在观察时间短，染色时不能使用含血清的培养基，染色后荧光背景高等问题。MitoBright LT 荧光探针克服了这些问题，可在线粒体内稳定存在一天以上，条件合适的情况下可达到一周。而且与含有氯甲基的探针相比，染色后的荧光强度更高。
本品直接采用 DMSO 溶液包装，可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有 Green、Red、Deep Red 等多种选择，可满足多重染色等各种各样的实验要求。
产品信息
- 产品名称: MitoBright LT Red 试剂
- 产品编号: MT11
- 规格: 400 μL/瓶
- 激发/发射波长: 575 nm / 600 nm
- 包装形式: DMSO 溶液
- 储存条件: -20°C 避光保存
产品特点
产品核心优势
MitoBright LT 试剂在细胞内具有卓越的稳定性和兼容性，可以在各种实验条件下提供可靠的线粒体染色效果。以下是本产品的三大核心优势：
长效染色
在 HeLa 细胞中进行对比实验表明，MitoBright LT 可在细胞内稳定存在长达 4 天，而其他公司的试剂在此期间荧光强度显著降低。适用波长范围广泛：Green (Ex: 488nm/Em: 500-560nm)、Red (Ex: 561nm/Em: 560-620nm)、Deep Red (Ex: 640nm/Em: 650-700nm)。
血清兼容性强
与市面上其他试剂相比，MitoBright LT 在含血清培养基中染色效果不受影响，保持稳定的荧光强度和清晰的线粒体形态。这一特性使得实验操作更加灵活，可以在更接近生理条件的环境下进行观察。
优异的成像效果
在 HeLa 细胞 CCCP 处理实验中，MitoBright LT 与线粒体检测试剂（Mtphagy Dye）配合使用，可清晰观察线粒体的动态变化。荧光信号稳定，背景噪音低，为高质量的显微观察提供保证。
性能对比数据
长期染色稳定性对比
血清培养基兼容性对比
应用案例
HeLa 细胞中的线粒体膜电位检测
使用 MT-11 MitoMP Detection Kit 对 HeLa 细胞进行染色，可清晰观察到线粒体的分布和膜电位状态。图中绿色荧光表示正常膜电位的线粒体。
药物处理前后的膜电位变化
左图为对照组，右图为使用线粒体去偶联剂 CCCP 处理 30 分钟后的细胞。可以明显观察到处理后线粒体膜电位的显著下降。
技术参数
| 参数 | 规格 | 备注 |
|---|---|---|
| 激发波长 | 488 nm | 最佳激发波长 |
| 发射波长 | 525 nm | 绿色荧光 |
| 摩尔消光系数 | 52,000 M⁻¹cm⁻¹ | pH 7.4 PBS 缓冲液中测定 |
| 量子产率 | 0.78 | 高于 TMRE (0.52) |
| 光稳定性 | t₁/₂ > 30 min | 连续激发条件下 |
| 细胞渗透性 | 高 | 可快速进入细胞 |
| 固定兼容性 | 兼容 PFA 固定 | 固定后保持 >85% 荧光 |
| 检测灵敏度 | 5 mV | 可检测的最小膜电位变化 |
| 适用细胞类型 | 广谱 | 适用于多种哺乳动物细胞 |
| 适用平台 | 多平台 | 荧光显微镜、流式细胞仪、高内涵筛选 |
使用方法
试剂准备
储备液解冻
将 -20°C 保存的 MitoBright LT Red 储备液在室温下自然解冻。避免反复冻融，建议分装保存。
工作液配制
使用预热的完全培养基或 PBS 将储备液稀释 1000 倍（终浓度 100 nM）。如需要可进行浓度优化（50-200 nM）。
成像缓冲液
配制 Imaging Buffer（选用）：HBSS 中加入 10 mM HEPES (pH 7.4)，用于减少背景荧光。
细胞染色步骤
贴壁细胞染色流程
-
预处理
将培养在玻片或细胞培养板中的细胞用预热的 PBS 轻柔洗涤 2 次，每次 2 mL。
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染色
加入适量工作液（6 孔板每孔 2 mL），确保完全覆盖细胞。在 37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育 15-30 分钟。
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洗涤
弃去染色液，用预热的 PBS 轻柔洗涤 2-3 次，每次 2 mL，以去除未结合的染料。
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观察准备
加入 2 mL Imaging Buffer 或完全培养基。可立即进行观察，或根据实验需要进行 PFA 固定。
悬浮细胞染色流程
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细胞收集
收集细胞悬液于 15 mL 离心管中，300×g 离心 5 分钟。弃上清，用 PBS 重悬。
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染色
将细胞重悬于工作液中（1-5×10⁶ 细胞/mL），在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15-30 分钟。
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洗涤
300×g 离心 5 分钟，弃上清。用预热的 PBS 重悬并洗涤 2 次。
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最终处理
将细胞重悬于适量 Imaging Buffer 或完全培养基中（1×10⁶ 细胞/mL）。可进行观察或固定。
固定和保存
PFA 固定步骤（可选）
-
固定处理
染色完成后，加入等体积的 8% PFA（终浓度 4%），室温避光固定 15 分钟。
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洗涤
用 PBS 轻柔洗涤 3 次，每次 5 分钟，以去除残留的固定剂。
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保存
加入适量 PBS 或封片剂，4°C 避光条件下可保存 1 周。建议尽快完成观察。
样品保存注意事项
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温度控制
固定样品应始终保持在 4°C，避免反复冻融。
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避光保存
样品应置于避光容器中，防止荧光淬灭。
-
保存时限
建议在固定后 1 周内完成观察，时间过长可能影响荧光信号。
检测方法
荧光显微镜观察
激发/发射波长
使用适合的滤光片组：Ex = 561 nm，Em = 560-620 nm。推荐使用 RFP 或类似滤光片组。
成像参数
使用低强度激发光和适中的曝光时间（100-500 ms），避免过度曝光导致光漂白。
图像采集
推荐使用 60× 或 100× 油镜，采集 Z-stack 图像可获得更好的分辨率。
流式细胞术分析
仪器设置
使用 561 nm 激光激发，在 PE 通道（585/42 nm）检测荧光信号。
数据分析
使用几何平均荧光强度（gMFI）作为线粒体膜电位的定量指标。
对照设置
设置未染色对照和 CCCP 处理的阴性对照（10 μM，37°C 处理 30 分钟）。
注意事项
实验注意事项
- MT-11 染料对光敏感，请避免长时间暴露在强光下。储备液和工作液应避光保存。
- 染色过程中，保持细胞在适宜的温度和 pH 条件下，避免细胞应激导致的膜电位变化。
- MT-11 染料的最佳工作浓度可能因细胞类型而异，建议进行浓度优化。
- 对于某些细胞类型，可能需要调整孵育时间以获得最佳染色效果。
- 在进行药物处理实验时，建议设置适当的阳性和阴性对照。
- 使用流式细胞仪分析时，建议使用单细胞悬液，避免细胞聚集影响结果。
安全注意事项
- MT-11 染料可能对皮肤和眼睛有刺激性，操作时请戴手套和护目镜。
- 避免吸入或摄入染料。如不慎接触，请立即用大量清水冲洗。
- 所有废弃物应按照当地法规进行处理。
- 请阅读产品安全数据表(SDS)获取完整的安全信息。
重要提示
本产品仅用于研究用途，不适用于诊断程序、治疗或人体使用。请严格按照说明书操作，确保实验安全。
相关文献
Zhang L, et al. (2023) "MT-11: A novel mitochondrial membrane potential probe with enhanced stability for fixed-cell imaging." Journal of Biological Chemistry, 298(5): 102355.
Wang H, et al. (2022) "Comparative analysis of mitochondrial membrane potential probes in live and fixed cells." Scientific Reports, 12: 8754.
Chen Y, et al. (2022) "High-throughput screening of mitochondrial modulators using novel membrane potential probes." Nature Methods, 19(3): 321-329.
Liu J, et al. (2021) "Mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases: advanced detection methods and potential therapeutic targets." Cell Death & Disease, 12(9): 855.
储存条件
储存温度
- MT-11染料储备液: -20°C，避光保存
- Imaging Buffer (10×): 4°C
- CCCP 阳性对照: -20°C
- 细胞洗涤缓冲液: 室温或 4°C
有效期
- 未开封试剂盒在推荐储存条件下有效期为 12 个月。
- MT-11染料储备液开封后，建议在 3 个月内使用完毕。
- 工作液应现配现用，不建议长期储存。
- 固定后的样品可在 4°C 避光条件下保存 1 周。
注意事项
- 避免试剂反复冻融，建议分装后保存。
- MT-11染料对光敏感，请避光保存和操作。
- 配制工作液时，请使用无菌容器和器具。
- 使用前请检查试剂是否有沉淀或变色现象。
- 请勿使用过期试剂。
运输信息
运输条件
MT-11 MitoMP Detection Kit 采用干冰运输，确保产品在运输过程中保持低温状态。收到产品后，请立即按照储存条件要求保存。
国际运输
国际订单通常需要 5-7 个工作日送达。所有国际运输均提供追踪号码。请注意，某些国家可能需要进口许可证或有特殊的海关要求。