产品概述
线粒体利用氧气合成 ATP，从而产生细胞所需的能量，是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此，线粒体膜电位（MMP）作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。
MT-1 MitoMP Detection Kit 是一种创新的线粒体膜电位检测试剂盒，专为解决传统检测方法的局限性而设计。本试剂盒采用全新的荧光染料技术，能够在固定细胞中保持稳定的荧光信号，大大提高了实验的重复性和可靠性。
该试剂盒适用于各种细胞类型，包括悬浮细胞和贴壁细胞，可用于流式细胞术、荧光显微镜和高内涵筛选等多种检测平台。无论是基础研究还是药物筛选，MT-1 MitoMP Detection Kit 都能提供准确、可靠的线粒体膜电位检测结果。
产品信息
- 产品名称: MT-1 MitoMP Detection Kit
- 产品编号: MT13
- 规格: 100 次/盒
- 激发/发射波长: 488 nm / 525 nm
- 检测方法: 荧光显微镜/流式细胞仪
- 应用范围: 活细胞/固定细胞
产品特点
解决传统试剂的三个问题
观察线粒体膜电位时，传统上使用 JC-1、TMRE、TMRM 等试剂，但这些试剂存在 PFA 不可固定、荧光易淬灭、数据重现性差等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit 克服了这些问题，成为线粒体膜电位检测的理想选择。此外，通过本试剂盒中包含的 Imaging Buffer，可以在抑制荧光背景和减少细胞损伤的状态下进行观察。
固定后也可检测
由于微小的细胞状态变化会导致线粒体膜电位发生变化，所以获取数据的重现性需要特别注意。传统线粒体膜电位检测试剂（JC-1、TMRE）在细胞固定处理后会失去荧光，因此需要使用活细胞进行快速测定。MT-1 即使在染色后进行 PFA 固定操作，也能保持荧光，从而实现高重复性实验。
可监控
在未进行药物刺激的细胞中，通过各种试剂染色后，我们确认了荧光强度的变化。结果显示，JC-1 和 TMRE 在染色后约 10 分钟左右荧光强度明显下降，而 MT-1 能够长时间保持稳定的荧光强度，为长时间监测线粒体膜电位变化提供了可能。
高灵敏度
线粒体膜电位的细微变化在使用 JC-1 时有时难以检测，在这种情况下，通常使用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）监测 MMP。MT-1 可提供与 TMRE 同等甚至更高的检测灵敏度，能够捕捉到线粒体膜电位的微小变化。
性能对比
荧光保持时间对比
固定后荧光强度对比
应用案例
HeLa 细胞中的线粒体膜电位检测
使用 MT-1 MitoMP Detection Kit 对 HeLa 细胞进行染色，可清晰观察到线粒体的分布和膜电位状态。图中绿色荧光表示正常膜电位的线粒体。
药物处理前后的膜电位变化
左图为对照组，右图为使用线粒体去偶联剂 CCCP 处理 30 分钟后的细胞。可以明显观察到处理后线粒体膜电位的显著下降。
技术参数
| 参数 | 规格 | 备注 |
|---|---|---|
| 激发波长 | 488 nm | 最佳激发波长 |
| 发射波长 | 525 nm | 绿色荧光 |
| 摩尔消光系数 | 52,000 M⁻¹cm⁻¹ | pH 7.4 PBS 缓冲液中测定 |
| 量子产率 | 0.78 | 高于 TMRE (0.52) |
| 光稳定性 | t₁/₂ > 30 min | 连续激发条件下 |
| 细胞渗透性 | 高 | 可快速进入细胞 |
| 固定兼容性 | 兼容 PFA 固定 | 固定后保持 >85% 荧光 |
| 检测灵敏度 | 5 mV | 可检测的最小膜电位变化 |
| 适用细胞类型 | 广谱 | 适用于多种哺乳动物细胞 |
| 适用平台 | 多平台 | 荧光显微镜、流式细胞仪、高内涵筛选 |
使用方法
试剂准备
- 将 MT-1 染料储备液在室温下解冻。
- 配制工作液：将 MT-1 染料储备液以 1:1000 的比例稀释到预热的完全培养基或 PBS 中，制成工作液。
- 准备 Imaging Buffer：按照说明书配制 Imaging Buffer，用于减少背景荧光和细胞损伤。
细胞染色步骤
贴壁细胞
- 将培养在适当容器中的细胞洗涤 2 次 PBS。
- 加入含有 MT-1 染料的工作液，使其覆盖细胞。
- 在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15-30 分钟。
- 弃去染色液，用预热的 PBS 洗涤细胞 2 次。
- 加入 Imaging Buffer 或完全培养基。
- 立即进行观察或进行 PFA 固定（可选）。
悬浮细胞
- 收集细胞并离心（300×g，5 分钟）。
- 弃去上清，用 PBS 重悬细胞并再次离心。
- 将细胞重悬于含有 MT-1 染料的工作液中。
- 在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15-30 分钟。
- 离心收集细胞，弃去染色液。
- 用预热的 PBS 洗涤细胞 2 次。
- 将细胞重悬于 Imaging Buffer 或完全培养基中。
- 立即进行观察或进行 PFA 固定（可选）。
PFA 固定步骤（可选）
- 染色完成后，用 4% PFA 在室温下固定细胞 15 分钟。
- 用 PBS 洗涤细胞 3 次，每次 5 分钟。
- 加入 PBS 或封片剂，进行观察或储存。
- 固定后的样品可在 4°C 避光条件下保存 1 周。
检测方法
荧光显微镜观察
- 使用适合的激发/发射滤光片组（Ex/Em = 488/525 nm）。
- 推荐使用 FITC 或 GFP 滤光片组。
- 为减少光漂白，建议使用低强度激发光和短曝光时间。
- 使用 Imaging Buffer 可进一步减少光漂白和背景荧光。
流式细胞术分析
- 使用 488 nm 激光激发。
- 在 FL1 通道（通常为 530/30 nm）检测荧光信号。
- 分析时，可使用平均荧光强度（MFI）作为线粒体膜电位的指标。
- 建议同时设置阴性对照（如 CCCP 处理的细胞）。
注意事项
实验注意事项
- MT-1 染料对光敏感，请避免长时间暴露在强光下。储备液和工作液应避光保存。
- 染色过程中，保持细胞在适宜的温度和 pH 条件下，避免细胞应激导致的膜电位变化。
- MT-1 染料的最佳工作浓度可能因细胞类型而异，建议进行浓度优化。
- 对于某些细胞类型，可能需要调整孵育时间以获得最佳染色效果。
- 在进行药物处理实验时，建议设置适当的阳性和阴性对照。
- 使用流式细胞仪分析时，建议使用单细胞悬液，避免细胞聚集影响结果。
安全注意事项
- MT-1 染料可能对皮肤和眼睛有刺激性，操作时请戴手套和护目镜。
- 避免吸入或摄入染料。如不慎接触，请立即用大量清水冲洗。
- 所有废弃物应按照当地法规进行处理。
- 请阅读产品安全数据表(SDS)获取完整的安全信息。
重要提示
本产品仅用于研究用途，不适用于诊断程序、治疗或人体使用。请严格按照说明书操作，确保实验安全。
相关文献
Zhang L, et al. (2023) "Novel mitochondrial membrane potential probe with enhanced stability for fixed-cell imaging." Journal of Biological Chemistry, 298(5): 102355.
Wang H, et al. (2022) "Comparative analysis of mitochondrial membrane potential probes in live and fixed cells." Scientific Reports, 12: 8754.
Chen Y, et al. (2022) "High-throughput screening of mitochondrial modulators using novel membrane potential probes." Nature Methods, 19(3): 321-329.
Liu J, et al. (2021) "Mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases: advanced detection methods and potential therapeutic targets." Cell Death & Disease, 12(9): 855.
储存条件
储存温度
- MT-1 染料储备液: -20°C，避光保存
- Imaging Buffer (10×): 4°C
- CCCP 阳性对照: -20°C
- 细胞洗涤缓冲液: 室温或 4°C
有效期
- 未开封试剂盒在推荐储存条件下有效期为 12 个月。
- MT-1 染料储备液开封后，建议在 3 个月内使用完毕。
- 工作液应现配现用，不建议长期储存。
- 固定后的样品可在 4°C 避光条件下保存 1 周。
注意事项
- 避免试剂反复冻融，建议分装后保存。
- MT-1 染料对光敏感，请避光保存和操作。
- 配制工作液时，请使用无菌容器和器具。
- 使用前请检查试剂是否有沉淀或变色现象。
- 请勿使用过期试剂。
运输信息
运输条件
MT-1 MitoMP Detection Kit 采用干冰运输，确保产品在运输过程中保持低温状态。收到产品后，请立即按照储存条件要求保存。
国际运输
国际订单通常需要 5-7 个工作日送达。所有国际运输均提供追踪号码。请注意，某些国家可能需要进口许可证或有特殊的海关要求。