产品概述
线粒体不仅是细胞中产生能量的场所，也是与癌症、衰老、神经退行性疾病（例如，阿尔茨海默症、帕金森症）等密切相关的最重要的细胞器之一。
近年来，随着显微镜技术的发展，有关细胞器的研究正在由原来的"单独研究线粒体的机能"逐渐向"线粒体与其他细胞器之间的相互作用"的方向转移。因此，对于线粒体的更详细的形态观察需求越来越大。
MitoBright IM Red克服了其他染料的靶向标记稳定性差的问题，是一种可以用于免疫荧光共染色线粒体荧光探针。本品直接采用 DMSO 溶液包装，可快速方便的进行线粒体染色。荧光颜色有 Green、Red、Deep Red 等多种选择，可满足多重染色等各种各样的实验要求。
产品信息
- 产品名称: MitoBright IM Red for Immunostaining
- 产品编号: MT15
- 规格: 20 μL × 3
- 激发/发射波长: 575 nm / 600 nm
- 包装形式: DMSO 溶液
- 储存条件: -20°C 避光保存
产品特点
产品核心优势
MitoBright LT 试剂在细胞内具有卓越的稳定性和兼容性，可以在各种实验条件下提供可靠的线粒体染色效果。以下是本产品的三大核心优势：
标记稳定性强、特异性高
MitoBright LT 荧光探针克服了传统探针的缺陷，可在线粒体内稳定存在一天以上，条件合适的情况下可达到一周。与含有氯甲基的探针相比，染色后的荧光强度更高，特异性识别能力更强。
可用于免疫荧光共染色
本品可与免疫荧光染色完美兼容，实现多重标记。直接采用 DMSO 溶液包装，可快速方便地进行线粒体染色。荧光颜色有 Green、Red、Deep Red 等多种选择，可满足多重染色等各种实验要求。
性能对比数据
| 评估项目 | MitoBright IM | MitoBright LT | T公司的产品 Tracker | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Red | Green | Red | Deep Red | Green | Red | Deep Red | |
| 产品形态 | DMSO 溶液 | DMSO 溶液 | 固体 | ||||
| 活细胞染色 | △ | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ |
| 活细胞中的停留能力 | × | ○ | ○ | ○ | × | × | × |
| 含血清培养基染色 | ○ | ○ | ○ | ○ | △ | △ | △ |
| 染色后的固定化(PFA) | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ | ○ |
| 染色后的固定化(MeOH) | ○ | × | × | × | × | × | × |
评估标准说明：
- ○: 优秀
- △: 一般
- ×: 较差
应用案例
实验例：与内质网标记物KDEL的共染色
检测条件
- MitoBright IM Red (红): Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm
- KDEL抗体-Alexa488 (绿): Ex: 488 nm, Em: 490-550 nm
- Scale bar: 10 μm
用MitoBright IM Red标记HeLa细胞的线粒体，经固定化和膜透性处理后再用内质网标记物KDEL的抗体进行免疫共染色。并且在右图的箭头所示范围内进行了荧光强度的检测，从荧光图像可以清晰的观察线粒体与附近的内质网的形态。
技术参数
| 参数 | 规格 | 备注 |
|---|---|---|
| 激发波长 | 488 nm | 最佳激发波长 |
| 发射波长 | 525 nm | 绿色荧光 |
| 摩尔消光系数 | 52,000 M⁻¹cm⁻¹ | pH 7.4 PBS 缓冲液中测定 |
| 量子产率 | 0.78 | 高于 TMRE (0.52) |
| 光稳定性 | t₁/₂ > 30 min | 连续激发条件下 |
| 细胞渗透性 | 高 | 可快速进入细胞 |
| 固定兼容性 | 兼容 PFA 固定 | 固定后保持 >85% 荧光 |
| 检测灵敏度 | 5 mV | 可检测的最小膜电位变化 |
| 适用细胞类型 | 广谱 | 适用于多种哺乳动物细胞 |
| 适用平台 | 多平台 | 荧光显微镜、流式细胞仪、高内涵筛选 |
使用方法
试剂准备
储备液解冻
将 -20°C 保存的 MitoBright LT Red 储备液在室温下自然解冻。避免反复冻融，建议分装保存。
工作液配制
使用预热的完全培养基或 PBS 将储备液稀释 1000 倍（终浓度 100 nM）。如需要可进行浓度优化（50-200 nM）。
成像缓冲液
配制 Imaging Buffer（选用）：HBSS 中加入 10 mM HEPES (pH 7.4)，用于减少背景荧光。
细胞染色步骤
贴壁细胞染色流程
-
预处理
将培养在玻片或细胞培养板中的细胞用预热的 PBS 轻柔洗涤 2 次，每次 2 mL。
-
染色
加入适量工作液（6 孔板每孔 2 mL），确保完全覆盖细胞。在 37°C、5% CO₂ 培养箱中孵育 15-30 分钟。
-
洗涤
弃去染色液，用预热的 PBS 轻柔洗涤 2-3 次，每次 2 mL，以去除未结合的染料。
-
观察准备
加入 2 mL Imaging Buffer 或完全培养基。可立即进行观察，或根据实验需要进行 PFA 固定。
悬浮细胞染色流程
-
细胞收集
收集细胞悬液于 15 mL 离心管中，300×g 离心 5 分钟。弃上清，用 PBS 重悬。
-
染色
将细胞重悬于工作液中（1-5×10⁶ 细胞/mL），在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15-30 分钟。
-
洗涤
300×g 离心 5 分钟，弃上清。用预热的 PBS 重悬并洗涤 2 次。
-
最终处理
将细胞重悬于适量 Imaging Buffer 或完全培养基中（1×10⁶ 细胞/mL）。可进行观察或固定。
固定和保存
PFA 固定步骤（可选）
-
固定处理
染色完成后，加入等体积的 8% PFA（终浓度 4%），室温避光固定 15 分钟。
-
洗涤
用 PBS 轻柔洗涤 3 次，每次 5 分钟，以去除残留的固定剂。
-
保存
加入适量 PBS 或封片剂，4°C 避光条件下可保存 1 周。建议尽快完成观察。
样品保存注意事项
-
温度控制
固定样品应始终保持在 4°C，避免反复冻融。
-
避光保存
样品应置于避光容器中，防止荧光淬灭。
-
保存时限
建议在固定后 1 周内完成观察，时间过长可能影响荧光信号。
检测方法
荧光显微镜观察
激发/发射波长
使用适合的滤光片组：Ex = 561 nm，Em = 560-620 nm。推荐使用 RFP 或类似滤光片组。
成像参数
使用低强度激发光和适中的曝光时间（100-500 ms），避免过度曝光导致光漂白。
图像采集
推荐使用 60× 或 100× 油镜，采集 Z-stack 图像可获得更好的分辨率。
流式细胞术分析
仪器设置
使用 561 nm 激光激发，在 PE 通道（585/42 nm）检测荧光信号。
数据分析
使用几何平均荧光强度（gMFI）作为线粒体膜电位的定量指标。
对照设置
设置未染色对照和 CCCP 处理的阴性对照（10 μM，37°C 处理 30 分钟）。
注意事项
实验注意事项
- MT-15 染料对光敏感，请避免长时间暴露在强光下。储备液和工作液应避光保存。
- 染色过程中，保持细胞在适宜的温度和 pH 条件下，避免细胞应激导致的膜电位变化。
- MT-15染料的最佳工作浓度可能因细胞类型而异，建议进行浓度优化。
- 对于某些细胞类型，可能需要调整孵育时间以获得最佳染色效果。
- 在进行药物处理实验时，建议设置适当的阳性和阴性对照。
- 使用流式细胞仪分析时，建议使用单细胞悬液，避免细胞聚集影响结果。
安全注意事项
- MT-15 染料可能对皮肤和眼睛有刺激性，操作时请戴手套和护目镜。
- 避免吸入或摄入染料。如不慎接触，请立即用大量清水冲洗。
- 所有废弃物应按照当地法规进行处理。
- 请阅读产品安全数据表(SDS)获取完整的安全信息。
重要提示
本产品仅用于研究用途，不适用于诊断程序、治疗或人体使用。请严格按照说明书操作，确保实验安全。
储存条件
储存温度
- MT-15染料储备液: -20°C，避光保存
- Imaging Buffer (10×): 4°C
- CCCP 阳性对照: -20°C
- 细胞洗涤缓冲液: 室温或 4°C
有效期
- 未开封试剂盒在推荐储存条件下有效期为 12 个月。
- MT-15染料储备液开封后，建议在 3 个月内使用完毕。
- 工作液应现配现用，不建议长期储存。
- 固定后的样品可在 4°C 避光条件下保存 1 周。
注意事项
- 避免试剂反复冻融，建议分装后保存。
- MT-15染料对光敏感，请避光保存和操作。
- 配制工作液时，请使用无菌容器和器具。
- 使用前请检查试剂是否有沉淀或变色现象。
- 请勿使用过期试剂。
运输信息
运输条件
MT-15 MitoMP Detection Kit 采用干冰运输，确保产品在运输过程中保持低温状态。收到产品后，请立即按照储存条件要求保存。
国际运输
国际订单通常需要 5-7 个工作日送达。所有国际运输均提供追踪号码。请注意，某些国家可能需要进口许可证或有特殊的海关要求。